細胞體外培養技術的應用,是人類開啟生命奧秘大門的鑰匙。該項技術的發展,科學家們能夠脫離供體的情況下,在實驗室中,研究并分析各種細胞的生命活動。高效的細胞培養來之不易,操作過程的實際情況十分復雜,存在諸多可能會影響培養效率的因素,包括實驗環境、實驗材料的選擇等。
一、實驗環境
細胞培養環境需要嚴格無菌,甚至是空氣都要使用新風系統進行過濾。對于墻壁、地板、桌面、超凈工作臺,更是要定期清潔。德國Minerva Biolabs公司的Mycoplasma-off™ Wipes和Mycoplasma-off™直接用于實驗環境、物品、儀器、設備的清潔。該試劑無需稀釋,噴灑或擦拭后自然風干,即可高效清除環境中的微生物污染。
細胞培養環境中,培養箱水槽,水浴鍋經常會有支原體以及各種細菌、霉菌滋生,稍有不慎或清洗不及時,水槽中的水源即會成為細胞污染的重要來源。保持水槽的潔凈,對細胞培養的順利進行非常重要。推薦:全球眾多實驗室日常都在使用德國MB公司生產的Water Shield™支原體污染防護劑(水槽用)。Water Shield™可持續作用四周,使水源避免受到支原體、細菌、真菌、霉菌、孢子的污染。按1:200的比例,加到水浴鍋或培養箱水盤的無菌水中即可
二、實驗材料的選擇
所培養的細胞,來源應清晰,確保無污染。對于培養試劑及耗材,也盡可能選擇無菌的。
細胞離不開高品質血清。而胎牛血清作為天然的培養基,在培養實驗中占有重要位置。選擇胎牛血清的重要指標之一,就是考察內毒素的含量。
內毒素在細胞傳代增殖過程中,會直接參與細胞凋亡的過程,一定劑量下,會給細胞培養帶來很多問題,特別是免疫細胞和干細胞,例如:誘導免疫細胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細胞集落的形成等。因此,血清中內毒素含量越低,對細胞毒性越小,越利于細胞的生長和傳代;反之,內毒素含量過高,會直接導致細胞狀態不良,提前老化,甚至死亡。
基于以上研究,用于細胞培養的牛血清,要通過嚴格的內毒素水平檢測,每一批血清都有完整的檢測報告,通過內毒素的檢測數值,對血清的品質進行分級和評估。
目前國際通用的分級方法,均以內毒素含量的高低來確定,內毒素含量越低,血清的級別就越高,以胎牛血清為例:
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優級胎牛血清;
當血清中內毒素含量≥25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;
Ausbian®進口特級胎牛血清,澳洲血源,均經過嚴格篩選, 目前所有批次內毒素都低于3EU/ml,其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的內毒素血清,更利于細胞的生長和傳代。